目的:采用网络药理学和分子对接的方法，探讨大柴胡汤治疗非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)的作用机制，并进行动物实验验证。方法:利用TCMSP和SwissTargetPrediction数据库收集并筛选大柴胡汤的活性成分及作用靶点，通过GeneCards、DrugBank、DisGeNET、OMIM及TTD数据库获取NAFLD的相关疾病靶点，并确定药物-疾病交集靶点。使用Cytoscape 3.9.1软件构建“药物-活性成分-靶点”网络和蛋白相互作用网络(PPI),进一步筛选出核心活性成分及核心靶点。利用Metascape数据库对交集靶点进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析，并对大柴胡汤治疗NAFLD的核心活性成分与核心靶点进行分子对接验证。构建高脂饮食诱导的NAFLD小鼠模型，通过动物实验验证网络药理学预测结果。结果:网络药理学预测得到90个大柴胡汤治疗NAFLD的潜在靶基因，核心靶点包括TNF、IL6、IL1B、TP53和PPARG等。核心活性成分包括原卟啉、11-二十碳烯酸、10,13-二十碳二烯酸、表小檗碱、滇刺枣碱D、山柰酚(kaempferol)等。GO功能富集分析结果表明，对细菌来源分子的反应、小分子代谢过程的正向调节、分泌调节等在生物过程中富集度较高；膜筏、受体复合物、胞质核周区等在细胞组分中富集度较高；核受体活性、单羧酸结合、蛋白质结构域特异性结合等在分子功能中富集度较高。KEGG通路富集结果表明，大柴胡汤可能通过调节过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)等信号通路发挥抗NAFLD的作用。分子对接结果显示，以上核心活性成分与核心靶点均具有良好的结合活性。动物实验结果表明，大柴胡汤可有效减少NAFLD模型小鼠的脂质、氧化应激和炎症因子的水平。大柴胡汤降低了血清TG、TC、LDL-C含量(P0.05或P0.01)、血清AST和ALT活力(P0.05或P0.01)、肝脏MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β含量(P0.05或P0.01),升高了血清HDL-C含量(P0.05)和肝脏SOD活力(P0.01);HE染色及油红O染色结果显示，大柴胡汤有效减轻了NAFLD模型小鼠的肝脏脂肪变性、空泡样病变和红色脂滴；大柴胡汤明显下调了肝脏Tnfa、Il6、Il1b的mRNA表达(P0.05或P0.01),上调Pparγ、Akt1、Ampk mRNA表达(P0.05)。结论:大柴胡汤可有效减轻NAFLD小鼠的脂质沉积、氧化应激及炎症反应，改善肝脏功能及减轻病理损伤，其作用机制可能与抑制TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌及调控PPARγ信号通路有关。