目的：通过网络药理学和动物实验探讨铁皮石斛对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的防治作用及机制。方法：利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-QE-HF-MS/MS）分析鉴定铁皮石斛入血成分；使用网络药理学和分子对接方法获取铁皮石斛防治NAFLD的药效物质和潜在靶点；使用高脂饲料复制NAFLD大鼠模型，生化试剂盒检测大鼠血脂、肝脂及肝功能表达水平，苏木素-伊红（HE）染色和油红O染色观察大鼠肝脏病理变化，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测验证网络药理学分析的潜在靶点。结果：从铁皮石斛中共分析鉴定出小檗碱、二氢血根碱、氧化前胡素等13个入血成分，网络药理学共筛选出叉头框蛋白O1(FoxO1)、表皮生长因子受体（EGFR）、胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）等14个潜在靶点，涉及晚期糖基化终末产物（AGE）/晚期糖化终产物受体（RAGE）信号通路、血脂与动脉粥样硬化、胰岛素抵抗和FoxO信号传导等途径。动物实验结果显示，成功复制NAFLD大鼠模型，经铁皮石斛预防治疗后NAFLD大鼠血脂、肝脂、肝功能等指标恢复正常，肝脏中脂质沉积和病变得到明显改善，肝脏中FoxO1 mRNA表达水平明显降低（P0.05），磷脂酰基醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、EGFR和IGF-1R mRNA表达水平明显升高（P0.05）。结论：铁皮石斛对NAFLD大鼠具有防治作用，作用机制可能与调控IGF1R和EGFR靶点，激活PI3K/Akt/FoxO1信号通路有关。