目的：鉴定安寐丹中主要化学成分，探讨安寐丹调控下丘脑细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)/丝裂原活化蛋白激酶相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（MNK）/真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)信号通路改善失眠大鼠昼夜节律的作用机制。方法：基于超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱（UPLC-LTQ/Orbitrap/MS）技术结合对照品对安寐丹主要化学成分进行鉴定。将60只雄性SD大鼠随机分为空白组，模型组，褪黑素组，安寐丹低、中、高剂量组，每组10只，除空白组外均采用对氯苯丙氨酸腹腔注射建立失眠模型；运用旷场实验、昼夜节律实验检测大鼠活动-静息节律，苏木素-伊红（HE）染色法、尼氏（Nissl）染色法观察下丘脑神经元细胞结构变化，免疫荧光、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测下丘脑ERK1/2/MNK/eIF4E通路相关mRNA和蛋白表达情况。结果：安寐丹中共检测出黄酮类、苯丙素类、三萜皂苷类、生物碱类、木脂素类等50个化学成分；与空白组比较，模型组运动总路程、平均速度、中心区停留时间和身体直立累计时长显著增加（P0.01），光照、黑暗活动累计时间和活动总时间显著延长（P0.01）；下丘脑神经元排列稀疏、数量减少、部分细胞核消失或核仁破裂、细胞凋亡指数显著上升（P0.01），胞质内混浊、尼氏体颜色变浅、尼氏体凋亡指数显著增高（P0.01）；下丘脑ERK1/2、MNK、eIF4E mRNA表达水平显著降低（P0.01）;ERK1/2、磷酸化（p）-ERK1/2、MNK、p-MNK、eIF4E、p-eIF4E蛋白表达水平均显著降低（P0.01）；与模型组比较，AMD高剂量组运动总路程、平均速度、中心区停留时间和身体直立累计时长均显著减少（P0.01），安寐丹中剂量组运动总路程、平均速度和身体直立累计时长均显著减少（P0.01），安寐丹各剂量组光照活动累计时间和活动总时间显著缩短（P0.01），安寐丹高剂量组黑暗活动累计时间显著延长（P0.01），安寐丹各剂量组昼、夜平均活动时间差异变大，安寐丹中、高剂量组神经元排列紧密、数量增多、下丘脑细胞凋亡指数明显下降（P0.05,P0.01），安寐丹低、中、高剂量组胞质内清晰、尼氏体颜色变深，尼氏体凋亡指数显著降低（P0.01），安寐丹中、高剂量组下丘脑ERK1/2、MNK、e IF4E mRNA和蛋白表达明显升高（P0.05,P0.01）。结论：安寐丹主要包括黄酮类、苯丙素类、三萜皂苷类等50个化学成分，具有多成分、多途径“协同增效”改善失眠的优点，其可通过上调ERK1/2/MNK/eIF4E信号通路相关蛋白改善PCPA所致失眠大鼠的昼夜节律紊乱。