黄芩清热除痹胶囊含药血清对强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞和人成纤维样滑膜细胞共培养后CircRNA_0001543 /NF-κB表达的影响
目的: 探讨黄芩清热除痹胶囊含药血清对强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)和人成纤维样滑膜细胞(FLSs)共培养后CircRNA_0001543/NF-κB表达的影响。方法: 抽取AS患者静脉血,分离提取PBMCs;购买FLSs,将FLSs与AS患者PBMCs进行细胞共培养,共培养后收集FLSs进行后续实验。正常对照组为正常FLSs,模型组为模拟AS病理状态的AS PBMCs与FLSs细胞共培养,黄芩清热除痹胶囊组为共培养细胞加入黄芩清热除痹胶囊含药血清。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-10、IL-37的水平和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测CircRNA_0001543、IκBα、NF-κB p65相关基因的表达。结果: 48 h时30%的黄芩清热除痹胶囊含药血清具有显著抑制AS PBMCs与FLSs共培养细胞的增殖,为最佳实验含药血清浓度。与正常对照组比较,模型组NF-κB p65 mRNA、IκBα mRNA、IL-1β、TNF-α的表达显著升高(P0.01),CircRNA_0001543 mRNA、IL-10、IL-37的表达显著降低(P0.01)。与模型组比较,黄芩清热除痹胶囊含药血清各组NF-κB p65 mRNA、IκBα mRNA,IL-1β、TNF-α的表达显著降低(P0.05),CircRNA_0001543 mRNA、IL-10、IL-37的表达显著升高(P0.05);且其中以30%含药血清组差异最明显(P0.01)。与si-NC 组比较,si-CircRNA_0001543组-3组CircRNA_0001543表达降低更显著(P0.01);与OE-NC组比较,OE-CircRNA_0001543组CircRNA_0001543表达明显升高(P0.01),表明si-CircRNA_0001543、OE-CircRNA_0001543质粒转染成功。黄芩清热除痹胶囊最佳含药血清浓度干预基础上,si-CircRNA_0001543后,NF-κB p65 mRNA、IκBα mRNA、IL-1β、TNF-α的表达显著升高(P0.01),IL-10、IL-37的表达显著降低(P0.01);OE-CircRNA_0001543后,NF-κB p65 mRNA、IκBα mRNA、IL-1β、TNF-α的表达显著降低(P0.01),IL-10、IL-37的表达显著升高(P0.01)。结论: 黄芩清热除痹胶囊含药血清能通过提高CircRNA_0001543的表达,调控NF-κB通路,抑制致炎因子,提高抗炎因子表达,从而改善AS免疫炎症。
中国实验方剂学杂志
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