为猪日本乙型脑炎病毒（Japanes encephalitis virus,JEV）提供一种更快捷便利的血清学检测方法，本试验建立了猪日本乙型脑炎病毒E蛋白（JEV-E）抗体磁微粒化学发光免疫分析法（CLIA）。以原核表达的JEV-E作为抗原包被磁微粒，与待检血清和碱性磷酸酶标记的Ig G抗体组成检测体系，定量检测猪血清中JEV抗体含量。结果显示，优化偶联条件后，最佳缓冲液pH值为5.0，最佳蛋白包被量为30μg/m L,5%BSA作为封闭剂，最适免疫磁珠保存液浓度为1 mg/m L；优化反应条件后，选择碱性磷酸酶抗体稀释度为1∶20 000，血清反应时间5 min，碱性磷酸酶反应时间10 min，底物反应时间7 min；建立的磁微粒化学发光法的阴阳性临界点判断标准为24.99 U；绘制受试者工作特征曲线（ROC），显示敏感性为99.5%，特异性为97.5%；该方法与猪细小病毒（PPV）、猪口蹄疫O型病毒（FMDV-O）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪链球菌（SS）、副猪嗜血杆菌（HPs）的阳性血清均无交叉反应；批间、批内变异系数均小于10%；敏感度与商品化试剂盒对比无显著性差异；与商品化试剂盒的符合率为98.27%。上述结果表明，该方法操作简单，试验流程方便快捷，可为JEV的快速诊断提供新的技术支持。