旨在为禽流感病毒多重快速分子诊断方法提供一种安全且稳定的阳性对照品，制备了含有禽流感病毒（AIV）M基因、H5和H7亚型HA基因保守区域的假病毒。通过基因合成获得含AIVM基因、H5和H7亚型HA基因保守区域的融合基因片段，构建pLV-M57-IRES-ZsGreen1重组穿梭质粒。并将构建成功的重组穿梭质粒与骨架质粒p MD2.G和psPAX2共转染至293 T细胞，转染24 h后进行绿色荧光观察，48 h后收集病毒液并测定其滴度。采用荧光RT-PCR对该重组慢病毒进行检测，经检测后的重组慢病毒按照标准方法检测M、H5和H7基因，最终对重组慢病毒进行数字PCR检测以获得病毒含量的绝对定量。PCR扩增鉴定和序列测定分析显示，M基因、H5和H7亚型HA基因保守区域融合基因片段正确克隆至穿梭质粒。转染后在24和48 h均能观察到明显的绿色荧光，收集的重组病毒液经荧光定量检测可出现特异性的扩增曲线，收获的重组病毒滴度为5.0×10~8TU/m L。重组慢病毒经反转录后，分别对其进行M、H5和H7这三种基因检测，结果显示均能有效检出。数字PCR检测结果显示制备的重组假病毒滴度约为9.0×10~8copies/μL。结果表明，本研究成功构建了含有AIVM基因、H5和H7亚型HA基因片段的假病毒，具有良好的检测有效性，可作为分子诊断检测技术中的阳性对照品，对病毒核酸的提取与各项检测过程实现全程监控。