本研究旨在制备PPV-NS1的多克隆抗体，并用猪细小病毒（PPV）和真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag进行双重验证。首先将PPV的非结构蛋白编码基因NS1克隆至原核表达载体pETDuet，构建原核质粒pET-PPV-NS1。接着，将原核质粒pET-PPV-NS1转化至感受态E.coli BL21细胞中，经由1 mmol/LIPTG诱导以后，通过SDS-PAGE和Western-blot对NS1表达进行检测，结果表明，NS1基因在感受态细胞中得到了良好的表达。其次，将纯化后获得的NS1蛋白采用多点注射的方式对大白兔进行免疫，制备获得针对重组NS1蛋白的多克隆抗体。然后，将真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag转染HEK 293T细胞；同时PPV感染ST细胞后收取蛋白样品，用上述制备的NS1多克隆抗体进行验证。结果显示，制备的NS1多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。