为建立一种快速、灵敏且适用于现场即时检验（POCT）锦鲤疱疹病毒（KHV）的方法，本研究根据KHV TK基因的保守序列，遵循荧光RAA引物及探针设计原则，设计多套KHV特异性引物及1条探针，通过试验筛选出最佳引物对，建立了KHV的重组酶介导等温扩增（RAA）荧光检测方法，并对该方法进行敏感性、特异性、重复性及临床样本测试。结果显示，本方法最低检测限为7.01×10~2 copies/μL，与WOAH推荐的TK基因PCR检测方法一致（同为7.01×10~2 copies/μL），高于Sph基因PCR检测方法（7.01×10~3 copies/μL），低于KHV real-time PCR检测方法（7.01×10~1 copies/μL）。RAA荧光方法特异性良好，与鲤春病毒血症病毒（SVCV）、真鲷虹彩病毒（RSIV）、金鱼造血器官坏死病毒（CyHV-2）、鳗鲡疱疹病毒（AngHV-1）、病毒性神经坏死病毒（VNNV）均无交叉反应，临床样本检测结果与WOAH推荐的两种检测方法结果一致，且仅需20 min。结果表明，锦鲤疱疹病毒RAA荧光检测方法具有简单快捷、敏感性高、特异性好等优点，可为实验室条件有限的养殖场及海关监管现场的快速病原筛查提供有效的技术手段，满足生产一线的疫病监测需求。