为建立抗猫传染性腹膜炎病毒（feline infectious peritonitis virus,FIPV）抗体竞争ELISA检测方法，应用原核表达FIPV截短N蛋白[rFIPV N(aa17-172)]免疫BALB/c小鼠，经细胞融合和间接ELISA方法筛选能稳定分泌针对重组N蛋白（17-172 aa）的杂交瘤细胞株，制备腹水并进行纯化和鉴定。以重组N蛋白为抗原，纯化后的单克隆抗体为一抗建立抗体竞争ELISA方法。试验结果显示，纯化后重组N蛋白浓度为0.5 mg/m L，纯度大于85%，将其作为包被抗原，通过间接ELISA筛选出3株单克隆杂交瘤细胞株，命名为5C5、1F8和4A10。纯化的3株单克隆抗体效价均高于1∶102 400。间接免疫荧光试验结果显示，3株单克隆抗体均能与FIPV发生特异性反应。抗体竞争ELISA方法最佳包被抗原浓度为1.25μg/m L，最佳抗体工作浓度为1∶128 000。通过检测本实验室保存的94份FIPV阴性血清，确定本研究建立的抗体竞争ELISA方法阳性阻断率≥20.1%，阴性阻断率≤15.9%。对62份猫血清和本实验室前期建立的FIPV抗S蛋白的抗体竞争ELISA方法进行符合率比较，两种方法符合率为85.5%。本研究建立的抗N蛋白抗体竞争ELISA方法可用于FIPV抗体的检测，为FIP诊断提供了技术支撑。