为了探究水蛭与熊胆联合作用于肝胆疾病的可能作用和分子机制,本研究首先利用网络药理学方法筛选水蛭和熊胆成分及其靶点和肝胆疾病的相关靶基因,将筛选出的关键基因进行交互作用网络和GO、KEGG富集分析,然后利用油酸钠诱导的HepG2细胞脂质沉积模型和DL-乙硫氨酸诱导的小鼠脂肪肝模型,在体内外对水蛭熊胆单独处理及联合作用降低肝脂的活性进行评价,并采用Western blot法检测网络药理学提示的关键通路相关蛋白的表达。网络药理学分析结果显示,水蛭、熊胆有效成分与肝胆相关疾病有295个交集靶点,涉及200多条信号通路,其中包括与糖脂代谢密切相关的PI3K/Akt信号通路、磷脂酶D信号通路等。体外验证实验结果显示,水蛭与熊胆单独及联合应用均可显著抑制油酸钠诱导的人肝细胞内脂质沉积,能够降低细胞培养上清TG水平,抑制肝细胞内脂质含量, Nile red染色共聚焦显微镜观察结果表明,水蛭与熊胆联合应用降低肝细胞内脂质沉积的活性相对单独用药更佳。在体内小鼠脂肪肝模型中,水蛭与熊胆联合应用能够更好地降低升高的脏器指数、血脂和肝脂水平,降低血清肝损伤生物标志物含量。本实验所用动物及相关处置符合动物福利的要求,实验开展前经过中国医学科学院药物研究所实验动物管理和使用委员会(IACUC)的审查批准。Western blot实验结果显示,水蛭与熊胆联合应用能够显著上调p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平,增加p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值,与网络药理学预测结果一致。水蛭熊胆联合应用有治疗脂肪性肝病的良好潜能,激活PI3K/Akt通路可能是其降低肝细胞脂质沉积的重要机制之一。