跨膜丝氨酸蛋白酶2 (transmembrane serine protease 2, TMPRSS2)是人体中广泛存在的细胞表面蛋白,参与严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)等多种病毒的感染和前列腺癌细胞侵袭、肿瘤生长和转移过程等。本研究使用Boc-Gln-Ala-Arg-AMC作为表征TMPRSS2切割活性的底物,在过表达TMPRSS2的Vero E6细胞(Vero E6/TMPRSS2)中建立了TMPRSS2抑制剂细胞筛选模型,通过对国家新药(微生物)筛选实验室天然与合成化合物纯品库进行高通量筛选,得到了7个具有TMPRSS2抑制活性的低毒化合物。表面等离子共振(surface plasmon resonance, SPR)检测证明所得抑制剂均可与TMPRSS2发生中等强度的结合,且呈现浓度依赖性;细胞-细胞融合实验表明,所得抑制剂可通过抑制TMPRSS2切割SARS-CoV-2 S蛋白,抑制SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞融合的发生,呈现浓度依赖性;假病毒活性评价结果显示,小分子抑制剂对野生型SARS-CoV-2假病毒感染Opti-HEK-293T-ACE2受体细胞表现出不同程度的抑制活性。本研究成功建立了细胞模型用于TMPRSS2抑制剂的高通量筛选,并初步证实筛选所得的抑制剂具有体外抗TMPRSS2活性的作用,为抗SARS-CoV-2的新药研发提供了新结构骨架。