【目的】拟通过构建高效杀虫枯草芽孢杆菌YZ-1的转座突变体库，从中筛选出高产表面活性素的突变体菌株，为后续YZ-1的表面活性素合成调控机制解析和开发利用提供前期材料。【方法】利用携带转座子TnYLB-1和温敏型复制蛋白的穿梭载体pMarA转化YZ-1,通过50℃高温诱导转座子转座，并对转座突变体进行抗性培养复筛，构建YZ-1菌株的转座突变体库。组合使用血平板法初筛，溴百里香酚蓝比色法复筛及HPLC定量检测，从突变体库中筛选表面活性素合成显著增强的突变体。【结果】通过自然转化将pMarA质粒导入枯草芽孢杆菌YZ-1中，获得含有3000株转座突变子的YZ-1突变体库，从中筛选出11株表面活性素合成增强的候选菌株。HPLC检测显示与YZ-1野生型相比，表面活性素合成量增强及相近的突变体有5株(M1、M6、M7、M8、M9),显著下降的有6株(M2、M3、M4、M5、M10、M11),其中表面活性素产量最高的为M8突变体(282.4 mg/L),较野生型增加13.7%,最低的为M2菌株(47.53 mg/L),较野生型下降80.9%。【结论】增设抗性复筛培养可提高YZ-1突变体库的正确率。基于血平板培养和溴百里香酚蓝比色的高通量筛选可初步筛选脂肽类产物显著变化的突变体菌株。