目的：通过测定蒙药健脾五味丸体外及小鼠灌胃后血中移行成分，研究其主要药效物质基础。方法：采用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）技术，SepaxHP-C_(18)柱（4.6 mm×250 mm,5μm），流动相为1%甲酸（A）-乙腈（B）梯度洗脱，将混合对照品溶液、健脾五味丸供试品溶液、空白血清和不同时间段的含药血清进行定性分析，使用全扫描模式正、负离子检测模式下采集色谱图，通过比对Xcalibur 3.0软件数据库、文献以及部分对照品的离子流图、质谱碎片裂解信息，鉴定目标化合物。结果：健脾五味丸供试品溶液鉴定出47个化合物，包括黄酮类、二萜类、环烯醚萜类和酚酸类，共鉴定出42个入血成分，其中30 min入血成分有40个，60 min入血成分有38个，90 min入血成分有37个，120 min入血代谢产物有32个。结论：该方法灵敏度高，可为蒙药健脾五味丸的药效物质基础研究提供参考。