目的：探讨吡非尼酮对三阴性乳腺癌4T1细胞增殖、迁移和侵袭能力影响的机制。方法：培养三阴性乳腺癌4T1细胞株，将不同浓度吡非尼酮（2、4、6、8 mmol/L）处理4T1细胞作为药物处理组，未加吡非尼酮处理4T1细胞为对照组。Western blot检测芳胺N-乙酰转移酶1（Arylamine N-acetyltransferase 1，NAT1）蛋白的表达；CCK-8实验和克隆形成实验检测吡非尼酮对三阴性乳腺癌4T1细胞的增殖能力；划痕实验和Transwell迁移实验检测吡非尼酮对三阴性乳腺癌4T1细胞的迁移能力；Transwell侵袭实验检测吡非尼酮对三阴性乳腺癌4T1细胞的侵袭能力；分子对接验证吡非尼酮与NAT1之间相互作用。结果：与对照组相比，吡非尼酮在8 mmol/L浓度时显著抑制NAT1的蛋白表达（P0.000 1）；与对照组相比，2、4、6、8 mmol/L吡非尼酮处理三阴性乳腺癌4T1细胞的增殖、迁移、侵袭能力逐渐减弱，具有浓度依赖性；其中，吡非尼酮浓度为8 mmol/L时显著抑制了三阴性乳腺癌4T1细胞的增殖、迁移与侵袭（P0.001）；此外，分子对接显示，吡非尼酮与NAT1之间存在氢键及疏水相互作用。结论：8 mmol/L吡非尼酮通过抑制NAT1蛋白表达进而降低三阴性乳腺癌4T1细胞增殖、迁移和侵袭能力。